qEVORIGINAL Gen 2 色譜柱
用戶指南
用於 qEVORIGINAL GEN 2 色譜柱（35 nm 和 70 nm）
本快速入門指南提供一般操作說明。
如需更多詳細信息，您可以從 Izon 支持門戶網站下載完整的 qEV 用戶手冊庫和其他資源： 支持.izon.com
安全數據表可在 support.izon.com/safety-datasheets
有可能的使用
qEV 柱從生物細胞中分離細胞外囊泡amp文件並配備了 RFID 芯片，可與自動餾分收集器 (AFC) 一起使用。
這些芯片不會影響手動使用。
qEV 色譜柱僅供專業人員在研究實驗室中使用，僅供研究使用。 qEV 柱不用於診斷目的，也不應用於做出治療決定。
操作建議
- 離心機amp在裝載柱子之前，以去除細胞和大的細胞碎片。 最初以 1,500 xg 離心 10 分鐘以去除任何細胞和大顆粒。 將上清液以 10,000 xg 重新離心 10 分鐘。
- 對於大容量amples，可以集中 sample 在將其加載到 qEV 列之前。 這不適用於血清和血漿amples，蛋白質含量非常高。 Izon 建議使用默克密理博濃縮設備和 Amicon® 超離心過濾器。
- 如果您打算分析囊泡中的核酸，Izon 建議一次性使用色譜柱。
- 確保 sample 緩衝液與色譜柱的溫度相同（最好在 18-24 ˚C 之間）。
- 僅使用新鮮過濾的 (0.22 µm) 緩衝液以避免污染。
使用說明書
qEVORIGINAL GEN 2 色譜柱規格
| Samp文件裝載量 | ≤ 0.5 毫升 |
| 柱體積 | 8.5 mL |
| 緩衝體積 | 2.5 mL |
| 最佳分數大小 | 0.4 mL |
| 每秒所需的緩衝區amp收藏 | 5.0 mL |
平衡
- 平衡色譜柱和 sample 緩衝區在 18-24 ˚C 的工作溫度範圍內。 在達到操作溫度範圍之前不要取下柱蓋。
- 僅小心取下頂蓋。
- 將立柱以直立位置連接到準備使用的支架上。 qEV 機架和自動餾分收集器可從 Izon Science 獲得。
- 如果可用，請連接一個色譜柱容器，並用緩衝液加滿。
列沖洗
1. 取下底蓋，讓緩衝液開始流經色譜柱。
2. 用至少一倍柱體積的緩衝液沖洗柱子。 如果您的下游應用受到疊氮化鈉的影響，請用至少 2 個柱體積的緩衝液沖洗。 如果要使用除 PBS 以外的洗脫緩衝液，請用至少 3 個柱體積的新緩衝液平衡柱。 當所有緩衝液都進入加載篩板時，色譜柱將自動停止流動。
手冊SAMP樂系列
- 過濾或離心生物ample 去除大顆粒物質。
請參閱上面的操作建議。 - 一旦緩衝液因沖洗而停止流入色譜柱，加載準備好的離心 sample 體積到裝載篩板。
避免在運行期間長時間停止色譜柱流動，以確保准確的 EV 分離。 - 立即開始收集緩衝區 volume1（這包括通過加載 sample）。
- 允許 sample 跑進列。 當所有的 s 列將停止流動amples 已進入裝載篩板。
- 用緩衝液加滿儲液罐/柱並繼續收集緩衝液體積。
要收集準確的體積，只需將所需體積加載到色譜柱頂部，等待體積流過直到流動停止，然後重複。 - 收集緩衝液體積後，繼續收集純化的收集體積 (PCV)2。 請參閱圖 1 和圖 2。
列沖洗和存儲
- 收集所需體積後，用 8.5 mL 的 0.5 M 氫氧化鈉 (NaOH) 沖洗柱子，然後用 17 mL 緩衝液沖洗柱子，然後再加載另一個 samp它們。
- 如果儲存色譜柱以備將來使用，請用含有抑菌劑（例如 0.05 % w/v 疊氮化鈉）或 20% 乙醇的緩衝液沖洗。
- 色譜柱在使用後可以在室溫下保存，前提是它們已按照上述說明進行清潔。 如果沒有合適的解決方案，則可以在使用後將色譜柱儲存在 4-8 ˚C。
¹緩衝液體積 – 在目標顆粒之前從柱中洗脫的緩衝液體積。
²純化收集體積 (PCV) – 由包含目標顆粒的色譜柱純化的體積。
有關選擇合適 PCV 的信息，請參閱完整的用戶手冊。
圖 1. 典型的洗脫專家file 用於加載 35 mL 人血漿的 qEVoriginal 2 nm Gen 0.5 色譜柱； 蛋白質在比囊泡更晚的體積中洗脫。
通過 BCA 分析使用 Exoid 和蛋白質水平測量囊泡濃度。
電動汽車和類似大小的粒子
蛋白質水平
圖 2. 蛋白質和 EV 洗脫 pro 的比較file介於 qEVoriginal/35nm Gen 2 和 qEVoriginal/70nm Gen 2 之間。概述的列是基於匯總的理論值ample 測量。
qEV/35 EVs 和類似大小的粒子
qEV/35 蛋白水平
qEV/70 EVs 和類似大小的粒子qEV/70 蛋白水平
文件/資源
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IZON qEVORIGINAL Gen 2 色譜柱 [pdf] 用戶指南 qEVORIGINAL Gen 2 色譜柱, qEVORIGINAL, Gen 2, 色譜柱 |
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IZON qEVORIGINAL GEN 2 [pdf] 用戶手冊 qEVORIGINAL GEN 2, qEVORIGINAL, GEN 2 qEVORIGINAL |
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